產(chǎn)品名	SDS-PAGE預(yù)制膠(Tris-Gly)
別名
英文名
CAS號
分子式
分子量
EINECS編號
MDL號

SDS-PAGE (Polyacrylamide Gel Electrophoresis)蛋白電泳技術(shù)廣泛用于蛋白質(zhì)的分離純化、檢測、鑒定、分子量分析等實驗，是生命科學(xué)研究中最基本的實驗技術(shù)之一。常見的Western印跡(Western blot)檢測就是基于SDS-PAGE的。
與傳統(tǒng)的Tris-Glycine凝膠不同，SDS-PAGE預(yù)制膠使用中性pH緩沖液制備，不含SDS，既可用于變性蛋白電泳，也可用于非變性蛋白電泳。電泳時采用推薦的含SDS的電泳液，即可獲得常規(guī)的SDS-PAGE的電泳效果。

使用說明：
1.將 SDS-PAGE預(yù)制膠從包裝袋中取出， 撕去膠板底端橙色膠紙。
2.將預(yù)制膠固定在電泳槽中，平穩(wěn)、緩慢地拔出梳子。
3.內(nèi)槽加滿電泳液，外槽的電泳液需要加到與內(nèi)槽持平的位置或稍低，但不可漫過膠板。用移液槍吸取電泳液輕輕吹打加樣孔，將加樣孔沖洗干凈，去除氣泡和殘留的儲存緩沖液。
(可使用常規(guī)的Tris-Glycine電泳緩沖液)。
4.上樣：將10微升槍頭或?qū)ｉT的上樣槍頭的尖端垂直方向輕輕插入到上樣孔中即能獲得非常理想的上樣效果，槍頭不能戳破凝膠，更不能使膠板變形導(dǎo)致樣品泄漏。注意：最佳上樣量須通過實驗來確定，樣品過量會導(dǎo)致條帶拖尾和失真。
5.將電泳槽蓋子蓋好，并將電源線插頭插入電泳儀電源插孔(紅對紅，黑對黑)。推薦使用先低壓80V電泳20分鐘，然后換高壓120V電泳約50-75分鐘，或者直接100V電泳約80-100分鐘，直至溴酚藍(lán)條帶電泳至凝膠近底部或?qū)嶒烆A(yù)定的位置。如果對于條帶平整性要求不高，可以直接120-150V電泳50-80分鐘。
6.取出膠板，用小螺絲刀或小撬板沿兩板間的縫隙將兩板別開，掰開兩個板，用梳子邊緣將塑料板底端縫隙中的凝膠頂出。
7.如果用于Western，按照常規(guī)條件進(jìn)行轉(zhuǎn)膜即可。通常濕轉(zhuǎn)的電流為300-400mA，轉(zhuǎn)膜30-60分鐘。
常見問題：
1.蛋白電泳示蹤染料溴酚藍(lán)扭曲、電泳大幅扭曲、電泳時間大幅度延長：
可能原因是內(nèi)外電泳槽緩沖液液面沒有一樣高，造成內(nèi)槽緩沖液泄漏而導(dǎo)致。建議內(nèi)槽加滿緩沖液，外槽的電泳緩沖液需要加到與內(nèi)槽持平的位置或稍低，但不可漫過膠板，從而防止在電泳過程中內(nèi)槽液面逐步下降。
2.使用自己配制的電泳緩沖液與上樣緩沖液電泳后條帶較模糊：
本預(yù)制膠pH為中性，對電泳緩沖液和上樣緩沖液的要求比傳統(tǒng)pH8.8的分離膠要高，緩沖液配制不當(dāng)，或長期放置變質(zhì)，都會對本預(yù)制膠的蛋白電泳效果產(chǎn)生影響。
3.在上樣時不可將槍頭過度插入上樣孔中，槍頭的過度插入會使膠板變形，導(dǎo)致樣品泄漏。
4.電壓為150V電泳時，每板膠的電流在30-55mA之間，隨著時間增加電流會逐步降低。如果電流明顯不在這一范圍，需檢查電泳液的質(zhì)量，及內(nèi)外槽電泳液液面是否一樣平。
5.濕轉(zhuǎn)時300-400mA恒定電流轉(zhuǎn)膜30-60分鐘，隨著時間增加電壓會逐步降低，例如從約150-200V降低到100-150V左右。由于本預(yù)制膠厚度為1mm，須適當(dāng)控制轉(zhuǎn)膜時間，以免蛋白轉(zhuǎn)到膜外。可以根據(jù)預(yù)制膠上殘留的預(yù)染marker及膜上的預(yù)染marker確定轉(zhuǎn)膜效率，并對轉(zhuǎn)膜條件進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。如果出現(xiàn)預(yù)制膠和膜上的預(yù)染marker都很少，說明蛋白有可能是轉(zhuǎn)到膜外了。
保存條件：
室溫保存，一年有效。4℃保存，兩年有效。
注意事項：
內(nèi)槽電泳液和轉(zhuǎn)膜液建議新鮮配制，試劑純度不夠、反復(fù)使用或長期放置的緩沖液會降低電泳效果。
電泳前請務(wù)必撕去膠板底端的橙色膠紙，否則電泳無法正常進(jìn)行。
本預(yù)制膠改進(jìn)了Bio-Rad的小型膠板兩側(cè)上端與硅橡膠密封條的凹陷結(jié)構(gòu)，使其兼容幾乎所有廠家的小型膠電泳槽。但這使得本預(yù)制膠對于Bio-Rad和天能的內(nèi)外槽電泳液存在少量泄露，此時建議外槽的電泳液加到與內(nèi)槽持平的位置或稍低，但不可漫過膠板，從而防止電泳過程中因內(nèi)槽液面逐步下降而導(dǎo)致電泳停止。電泳結(jié)束后的電泳緩沖液可以作為外槽緩沖液重復(fù)使用1-2次。或者將凹陷結(jié)構(gòu)的硅橡膠密封條取出后反過來安裝，使其沒有凹陷的平滑面朝外，從而防止漏液。另外，天能等公司都已經(jīng)配套無凹陷結(jié)構(gòu)的硅橡膠密封條，使用這樣的硅橡膠密封條就不會出現(xiàn)內(nèi)外槽之間的漏液現(xiàn)象。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。